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恒遠(yuǎn)周五實(shí)驗(yàn):用TRIzol索取RNA方式步驟全過(guò)程

點(diǎn)擊次數(shù):13026   發(fā)布時(shí)間:2014/3/7 10:34:37

     今天到這里為止,還是陽(yáng)光大好,我們現(xiàn)在來(lái)看什么實(shí)驗(yàn)?zāi)?這是一個(gè)TRIzol索取RNA實(shí)驗(yàn),我公司為朋友們整理出了全方面的過(guò)程,除了步驟之外,我們還會(huì)講到一些試劑的準(zhǔn)備以及要注意的事項(xiàng)。下面就來(lái)看看恒遠(yuǎn)周五實(shí)驗(yàn):用TRIzol索取RNA方式步驟全過(guò)程。

在實(shí)驗(yàn)之前需要準(zhǔn)備好的試劑:
1、TRIzol試劑。
2、氯仿
3、異丙醇
4、75%乙醇(DEPC H2O配制)
5、DEPC H2O
用TRIzol索取RNA方式的七個(gè)步驟:
1、樣品處理
① 培養(yǎng)細(xì)胞:收獲細(xì)胞1-5×107,移入1.5ml離心管中,加入1ml Trizol,混勻,室溫靜置5min。
② 組織:取50-100mg組織(新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可)置1.5ml離心管中,加入1ml Trizol充分勻漿,室溫靜置5min。
2、加入0.2ml氯仿,振蕩15s,靜置2min。
3、4℃離心,12000g×15min,取上清。
4、加入0.5ml異丙醇,將管中液體輕輕混勻,室溫靜置10min。
5、4℃離心,12000g×10min,棄上清。
6、加入1ml 75%乙醇,輕輕洗滌沉淀。4℃,7500g×5min,棄上清。
7、晾干,加入適量的DEPC H2O溶解(65℃促溶10-15min)。
上海恒遠(yuǎn)為朋友們整理出的本次實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng):
1、樣品量和Trizol的加入量一定要按步驟(1)的比例,不能隨意增加樣品量或減少Trizol量,否則會(huì)使內(nèi)源性RNase的抑制不完全,導(dǎo)致RNA降解。
2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程必須嚴(yán)格防止RNsae的污染。
總RNA定量
    方法與DNA定量相似。RNA在260nm波長(zhǎng)處有的吸收峰。因此,可以用260nm波長(zhǎng)分光測(cè)定RNA濃度,OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。如用1cm光徑,用 ddH2O稀釋DNA樣品n倍并以ddH2O為空白對(duì)照,根據(jù)此時(shí)讀出的OD260值即可計(jì)算出樣品稀釋前的濃度:
  RNA(mg/ml)=40×OD260讀數(shù)×稀釋倍數(shù)(n)/1000
    RNA純品的OD260/OD280的比值為2.0,故根據(jù)OD260/OD280的比值可以估計(jì)RNA的純度。若比值較低,說(shuō)明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。
    以上就是實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程了,非常感謝您對(duì)上海恒遠(yuǎn)的支持!又到周五,是本周的*后一個(gè)工作日啦,明天就是婦女節(jié)了,我公司開(kāi)展了促銷送禮哦!打8.3折還送八折精美小禮物呢,產(chǎn)品需要來(lái)電詢我公司葉經(jīng)理哦!

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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