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ELISA試劑盒總結(jié)分享冰凍切片實驗小竅門

點擊次數(shù):12852   發(fā)布時間:2014/7/1 10:03:52

     每一位實驗者們都有屬于自己的科研體會和實驗技巧中的竅門,而有的竅門可能是書本上學(xué)不到的。對于新入實驗室學(xué)生們來說,多聽師兄師姐們的實驗心得可以使自己更快進入科研角色,避免走很多彎路。下面我們就來看看elisa試劑盒總結(jié)分享冰凍切片實驗小竅門。

    1、室溫下復(fù)溫30Min 0.01MPBS清洗5Min×3;
    2、加入配好的0.3% TritonX100 30Min。以增加細(xì)胞的通透性,0.01MPBS清洗5Min×3;
    3、5%小牛血清封閉1 h0.  01 MPBS清洗5  Min×3;
    4、加入用血清稀釋液稀釋的一抗,4 ℃存放24-48 h;吸去抗體,0.01MPBS洗5Min×3;
    5、加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液30Min。以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響,0.01MPBS清洗5Min×3;
    6、加入0.01MPBS稀釋的的二抗.室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5Min×3;
    7、加入ABC復(fù)合物之類的抗體.室溫孵育2h。0.01MPBS洗5Min×3;蒸餾水迅速沖三次;
    8、加入顯色液,進行免疫組織化學(xué)顯色。時間一般不超過30Min.可不時在顯微鏡下進行觀察,待細(xì)胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液。用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MKPBS終止反應(yīng);
    9、梯度酒精脫水之后,封片、拍照。
    細(xì)節(jié)將消除內(nèi)源性過氧化物酶這一步放在后面,能避免雙氧水對目的蛋白的影響。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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