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最新ELISA試劑盒研發(fā)/生產(chǎn)要求公布

點擊次數(shù):13247   發(fā)布時間:2014/9/15 10:02:28

    試劑盒的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在了超高的特異性、正確性、精確度等幾個方面,質(zhì)量及其優(yōu)點與研發(fā)生產(chǎn)有著密切的關(guān)系,下面一起隨上海恒遠來看*新elisa試劑盒研發(fā)/生產(chǎn)要求公布。
    首先,我們先來為您對其特異性進行一個具體的講解,其實特異性也就是指在PCR擴增過程中,專一性地擴增目的片斷而非其他片斷的機能。PCR實驗的敏捷度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實驗體系調(diào)節(jié)實際就是找到適合實驗的敏捷度與特異性的平衡點。
    模板、引物性 質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)前提的控制等均會影響PCR擴增的特異性。在PCR實驗本身的敏捷度很高,且實驗前提未充分優(yōu)化的情況,通常會在目的片斷泛起的同時伴隨有其他的雜帶,即發(fā)生非特異性擴增的現(xiàn)象。近年來的研究結(jié)果表明,緩沖液的品質(zhì)對保證PCR的特異性擴 增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)SO4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié),明顯進步了PCR擴增的特異性,降低背景。因為PCR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜。
    
    在優(yōu)化免疫學(xué)反應(yīng)前提后,建立了克百威間接競爭ELISA法和直接競爭ELISA法,檢測限分別為0.005mg/L和0.01mg/L,檢測線性范圍分別為0.005~10mg/L和0.01~10mg/L,并在此基礎(chǔ)上研制了兩種用于檢測水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒,其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好,批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0%,試劑盒檢測的正確度高,除嘔吐物樣品外,其余樣品的回收率均在89.62%以上。
    ELISA試劑盒研發(fā)以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎(chǔ)合成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得高效價、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用間接ELISA測定效價為1:16000~1:128000,純化抗體效價為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標抗體,同時了測定了酶標抗體的活性,效價為1:4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應(yīng)率6.19%,與呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均小于0.44%,對于三種有機磷農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均低于0.12%。 同時,根據(jù)抗體抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)的原理,進一步研究了抗克百威抗體對小鼠克百威中毒后的解毒作用,試驗結(jié)果表明,抗體可以較好地緩解克百威對乙酰膽堿酯酶按捺作用的癥狀,使中毒小鼠逐漸恢復(fù)正常。同時將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測定克百威與載體蛋白結(jié)合物結(jié)合比。
    
    試劑盒檢測限為0.04μg/kg,樣本添加回收率為69.4%~107.5%,批內(nèi)變異系數(shù)為7.8%~14.6%,批間變異系數(shù)為10.9%~16.5%。分別利用戊二酸酐法和碳化二亞胺法合成半抗原和免疫抗原免疫動物,制備特異性強的單克隆抗體。與儀器分析技術(shù)比擬具有使用利便、高敏捷度等特點,可在硝基咪唑類藥物的殘留量檢測中施展重要作用。本實用新型涉及一種硝基咪唑類藥物殘留量檢測的酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒。該試劑盒組成包括:96孔酶標板、酶標二抗工作液、硝基咪唑類藥物抗體工作液、硝基咪唑類藥物7個濃度的尺度品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。該方法的建立為硝基咪唑類藥物殘留的檢測提供了便捷、正確的分析檢測手段。在篩選硝基咪唑類單克隆抗體的基礎(chǔ)上,建立ELISA檢測方法,并研制出對雞肉中硝基咪唑類藥物殘留檢測試劑盒。采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中含有的硝基咪唑類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗硝基咪唑類藥物抗體,加入酶標二抗后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與尺度曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中硝基咪唑類藥物的殘留量。
    以上就是ELISA試劑盒研發(fā)與生產(chǎn)的要求,上海恒遠提供各種種屬試劑盒,嚴把產(chǎn)品質(zhì)量關(guān),致力提供優(yōu)質(zhì)、價位合理的科研產(chǎn)品,全面提升科研試劑的質(zhì)量,將有利于更好地保障科研結(jié)果。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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