周五是大多學(xué)生黨和上班族較為期待的日子，我公司技術(shù)專員特意為大家準(zhǔn)備十幾條ELISA操作的重點細(xì)節(jié)，閱讀之后可以總結(jié)一下您在實驗中有哪些重點被忽略掉了。熱愛ELISA實驗的新手們需注意這些細(xì)節(jié)： 1.不管是試劑盒，還是其它產(chǎn)品，在使用之前我們都要仔細(xì)閱讀說明書。
2.同樣的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
3.按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。
4.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。
5.ELISA實驗中為了確定*佳信號和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。 6.標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
7.一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
8.根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。
10.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
11.為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
12.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
13.當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
14.準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。
了解更多ELISA實驗技術(shù)資料，歡迎您致電給我公司業(yè)務(wù)員咨詢。2015年elisa試劑盒新品即將上市，敬請關(guān)注： 原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
總訪問量：7585633 管理登錄
