為了刺激研究界實現(xiàn)更高標準的抗體重復性，抗體驗證工作組（IWGAV）近日出臺了一套指南。這些指南發(fā)表在9月5日的《Nature Methods》雜志上，強調(diào)了抗體驗證需要針對應(yīng)用和背景來開展。 這篇題為“A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的數(shù)名成員發(fā)表的，包括工作組主席、瑞典皇家理工學院的微生物學教授Mathias Uhlén。文章提出了五點，以指導特定應(yīng)用中的抗體驗證。
• 遺傳策略：測定對照細胞或組織中的相關(guān)信號，這些對照中的目標基因已利用CRISPR或RNAi等技術(shù)敲除或敲低。
• 正交策略：利用不依賴抗體的方法定量多個樣品，然后檢查依賴抗體和不依賴抗體這兩種定量之間的相關(guān)性。
• 獨立抗體策略：利用兩個或更多的獨立抗體來識別目標蛋白上的不同表位，再通過比較和定量分析來確認特異性。
• 表達標記蛋白：修飾內(nèi)源的目標基因，增加親和標簽或熒光蛋白的序列。標記蛋白的信號可與基于抗體的檢測相關(guān)聯(lián)。
• 免疫捕獲加上質(zhì)譜分析：將免疫捕獲與MS分析相結(jié)合，以確定與純化的抗體直接作用的蛋白質(zhì)，以及可能與目標蛋白形成復合物的蛋白質(zhì)。
這篇文章還對生產(chǎn)商和使用者提出建議，以確保長期的抗體重復性。作者們建議使用者在自己特定的應(yīng)用或樣品中，至少運用上面的一種策略來開展驗證。同時，他們還建議使用者按照一定的形式報告，包含貨號、批號和RRID（研究資源標識符），以確保研究中使用的任何抗體可被明確識別。
同時，作者們也向生產(chǎn)商提出了類似的建議，至少運用一種策略來驗證，并提供盡可能多的抗體信息，如鑒定檢測中的抗體濃度、細胞提取物的濃度、抗體生產(chǎn)所用的免疫原、抗體-表位的親和力、緩沖液配方等。
“這篇文章邁出了重要的步，有望制定出廣泛接受的抗體驗證標準，確保生命醫(yī)學研究使用高質(zhì)量且一致的抗體，”Uhlén博士表示。“我們期待抗體用戶、出版商、資助機構(gòu)和生產(chǎn)商的反饋，以幫助加強這個初步建議，并確保這些基本工具的可靠性。”
在文章發(fā)布之后，抗體生產(chǎn)商 – 賽默飛世爾公司承諾，它將按照IWGAV的建議來驗證其抗體的特異性。賽默飛表示，它將很好地遵循這個指南，并借助其的質(zhì)譜、CRISPR和siRNA平臺來開展驗證。此外，對于通過新標準的抗體，公司會在網(wǎng)站上標注，以表示它通過特異性檢測。
賽默飛世爾的生命科學部門總裁Peter Silvester表示：“賽默飛世爾很高興看到抗體驗證工作組的個建議。我們相信，這些標準將有助于對抗用戶在使用這些關(guān)鍵工具時面臨的挑戰(zhàn)。我們承諾按照IWGAV的標準來測試我們的抗體，這證明了我們對科學的承諾，以及我們提供特異抗體的使命。”
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
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