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影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些?

點(diǎn)擊次數(shù):14222   發(fā)布時間:2017/6/28 11:18:10

       ELISA 方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但 ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時?梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性結(jié)果)。引起 ELISA 測定錯誤結(jié)果有哪些呢?下面我們來分析分析:
1.方法學(xué)的影響
      ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的不公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。
2.試劑因素
      不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量完全一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
3.樣本因素
      標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
4.操作因素
      ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
5.灰區(qū)的設(shè)置
      通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
6.標(biāo)本復(fù)查
      ELISA手工檢測過程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
7.常表示結(jié)果的常用方法
     a.定性測定
     b.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
     c.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以絕對量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 

      上海恒遠(yuǎn)生物公司是一家生物技術(shù)企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。公司專業(yè)代理美國BIM、R&D、Amresco、Sigma、Pharmacia、Abcam等各大品牌高質(zhì)量試劑盒和生物科研試劑,產(chǎn)品涵蓋elisa試劑盒、生物試劑、抗體、對照品、血清、細(xì)胞、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)耗材等,公司產(chǎn)品幾乎涉及所有領(lǐng)域。歡迎來電咨詢選購。

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