18221656311
聯(lián)系人:錢經(jīng)理
電 話:18221656311
手 機(jī):18221656311
地 址:上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座
郵 編:200093
傳 真:021-64881400
郵 箱:2885617636@qq.com
阿儀網(wǎng)商鋪:http://www.app17.com/c58469/
手機(jī)網(wǎng)站:m.hybiosh.com
點(diǎn)擊次數(shù):13286 發(fā)布時(shí)間:2020/1/13 9:12:19
1.石蠟切片脫蠟至水:(石蠟切片染色前應(yīng)置 60℃ 1 小時(shí)) 。
① 二甲苯 、II,各 10 分鐘。
② 梯度酒精:100%,2 分鐘 95%,2 分鐘 80%,2 分鐘 70% 2 分鐘。
③ 蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。
2.過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶:3%H2 O2 ,室溫 10 分鐘(避光) 。
3.蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
4.抗原修復(fù):根據(jù)待檢測(cè)的抗原,選擇適當(dāng)?shù)姆椒ā?/p>
附:抗原修復(fù)液(10mMpH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液)的配制:
① 儲(chǔ)備液的配制:A 液:枸櫞酸三鈉- 2H2O 29.41g + 蒸餾水 1000ml;B 液:枸櫞酸 21g + 蒸餾水 1000ml;
② 工作液的配制:A 液 82ml+ B 液 18ml+ 蒸餾水 900ml
抗原修復(fù)的方法:
① 高壓鍋處理技術(shù):枸櫞酸鈉緩沖液(10mM,PH6.0),淹沒切片,蓋上鍋蓋,高壓鍋內(nèi)煮沸,上汽 3 分鐘后緩慢冷卻(可用自來水在高 壓鍋外沖,以助冷卻) 。
② 微波處理技術(shù):用塑料切片架,置于塑料或耐溫玻璃容器內(nèi),枸櫞酸 鈉緩沖液淹沒切片,選擇中高或高檔,5 分鐘;取出并補(bǔ)充已預(yù)熱的 枸櫞酸鈉緩沖液; 再選擇中高或高檔,5分鐘(.*佳溫度為 92 95℃)
③ 酶消化處理。
抗原修復(fù)的注意事項(xiàng):
① 組織不能干。
② 選擇抗原修復(fù)方法要因抗體而異。
③ 該方法主要用于 10%福爾馬林固定、石蠟包埋組織。
④ 抗原修復(fù)后至 DAB 顯色的過程中,均需用 PBS 緩沖液。
5.PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
6.正常血清封閉:從染片缸中取出切片,擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分 (保持組織呈濕潤狀態(tài),)滴加正常山羊或兔血清 (與第二抗 體 同源動(dòng)物血清)處理,37℃,15 分鐘。
附:正常血清配制 ( 或按試劑盒規(guī)定的濃度配制):按 1:20比例,用 PBS 配制,每張切片需要量按 50μ+5μl (10%拋灑量) 計(jì)算。
7.滴加抗體:用濾紙吸去血清,不洗,直接滴加抗體,37℃ 2 小時(shí)(也可置于 4℃冰箱過夜) 。
8.PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
9.滴加生物素化的二抗,37℃,40 分鐘。
10.PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
11.滴加三抗 (SAB 復(fù)合物) ,37℃,40 分鐘。
12.PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
13.DAB 顯色,鏡下觀察,適時(shí)終止(自來水沖終止) 。
附:DAB 的配制① 儲(chǔ)備液(DAB 25mg/ml)的配制:DAB 250mg + PBS 10ml,待完全溶解后分裝成 1ml,100μl,50μl ,20μ l 等,-20℃,凍存。② 工作液:DAB 儲(chǔ)備液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl
14.自來水(細(xì)水)充分沖洗。
15.蘇木素復(fù)染,室溫,30 秒,自來水沖洗。
16.自來水沖洗返藍(lán),15 分鐘。
17.梯度酒精脫水:80%,2 分鐘 95%,2 分鐘 100%,2 次,5 分鐘。
18.二甲苯透明:I ,II (二甲苯)各 5 分鐘。
19.封片:加拿大樹膠(或中性樹膠)封片。
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
掃一掃,關(guān)注我們!
首 頁| 公司介紹| 產(chǎn)品展示| 公司新聞| 技術(shù)文章| 聯(lián)系我們| 客戶留言
阿儀網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作,未經(jīng)允許翻錄必究. 聯(lián)系人:錢經(jīng)理 聯(lián)系電話:18221656311 ICP備案號(hào):滬ICP備11004148號(hào)-11 總訪問量:7681605 管理登錄
主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,裸鼠ELISA試劑盒,倉鼠ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,培養(yǎng)基和生物試劑等