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為何ELISA試劑盒實驗會失。

閱讀次數(shù):1034   發(fā)布時間:2014/9/16 9:20:44

    ELISA新手*一開始了解的就是其原理,大家都知道這一實驗常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法靈敏,特異性強不需要特殊設備,所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。實驗并非可能一次便成功,那么為何elisa試劑盒實驗會失敗呢?
    ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗中除正常反應外,有時?梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)如標本的影響,對這一方面上海恒遠生物來為大家細細解讀:
 1. 溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以完全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。
 2. 標本受細菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
 3. 標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。
    塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
    標本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
    能夠熟練的掌握好ELISA試劑盒實驗的每一步注意與技巧之后還怕結(jié)果不佳?配上上海恒遠優(yōu)質(zhì)ELISA試劑盒定能助您實驗成功!

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