（1）問：小鼠乙酰膽堿Elisa試劑盒后期數(shù)據(jù)處理中空白的OD值有什么作用？

     答：可以將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值同時減去空白的值進行計算，或者都不減，保持同一水平就行。 

（2）問：那我們算出來的ACH含量為什么出現(xiàn)負(fù)值？

     答：說明個別樣本的濃度很低,當(dāng)濃度接近第6個點的時候,直線方程就有可能計算出負(fù)值。

（3）問：小鼠乙酰膽堿ELISA試劑盒，組織標(biāo)本 切割標(biāo)本后能用生理鹽水稀釋嗎？還有稀釋的倍數(shù)是多少?

     答：生理鹽水也可以，加入量1:3。

（4）問：我想問一下，標(biāo)準(zhǔn)品濃度與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值之間是不是線性回歸？檢測出來的吸光度值很低一般都存在哪些原因？大部分在0.08左右 ？（大鼠5羥色胺（5-HT）Elisa試劑盒）

     答：是線性回歸。檢測出來的值比較低 ，樣本、稀釋、操作等，原因很多，但只要在可操作范圍就行 。 

（5）問：做出來的結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度呈線性回歸，但是樣品的吸光度都和本體吸光度值接近，正常未予干預(yù)的大鼠血漿都基本沒有5-HT 表達(dá)，這是什么原因？（大鼠5羥色胺（5-HT）Elisa試劑盒）

     答：樣本、稀釋、室控和機器操作等，原因都可能造成吸光度都和本體吸光度值接近，好像熒光法里面有種試劑盒可以檢測滴度。

（6）問：Elisa試劑盒的使用的方法是什么啊？

     答：采用雙抗夾心法 （目前暫行）

（7）問：一個孔需要多少量的血清？

     答：一個孔上樣量10-50微升。

（8）問:未處理的樣本我需要郵寄多少的量？

     答：每個孔需要100ul

（9）問：樣本怎么保存？

     答：當(dāng)天要用的樣本保存4℃，隔天樣本-20℃（近期一個月左右要用的樣本），長期保存樣本-70℃（一年或者更長時間多久都可以用），避免反復(fù)凍融。

（10）問：EP管是什么管？

      答：離心管。

（11）問：收集血清的時候用什么管？

      答：普通離心管即可。

（12）問：96t可以檢測多少個樣本？48t可以檢測多少個樣本？

      答：96t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測85個樣本，其他有10個標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個空白對照。96t單孔可以檢測90個樣，7個標(biāo)準(zhǔn)品控 1個空白對照。48t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測37個樣本，其他有10個標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個空白對照。48t單孔可以檢測40個樣本，其他有7個標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個空白對照。

（13）問：標(biāo)準(zhǔn)的檢測85個樣本的和單孔相比， 有什么好的地方嗎？

      答：標(biāo)準(zhǔn)的檢測又叫復(fù)孔檢測，標(biāo)準(zhǔn)的檢驗重復(fù)性測的結(jié)果好，所以大家都叫復(fù)孔是標(biāo)準(zhǔn)的檢測。

（14）問： 酶標(biāo)板分次使用 剩下的建議怎么保持 ？

      答：要是真的用不完或標(biāo)本不多的情況下。做點處理后：板條和板架都是可拆卸的，可以再用之，前拆下4條放置錫箔袋或其他無污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（15）問：酶標(biāo)包被版是酶標(biāo)板嗎？

      答：是的。

（16）問：請問植物茉莉酸和水楊酸檢測的試劑盒，我們提取擬南芥的，一般取樣量是多少？

      答：1-3g。

（17）問：大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA，大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5B），我發(fā)現(xiàn)試劑盒里缺少標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，沒有它我的實驗無法進行，盒子里面有特殊稀釋液是用來稀釋樣品的，但都沒有標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，我的樣品已超出檢測限，所以需要稀釋標(biāo)準(zhǔn)品才行嗎？

     答：特殊稀釋液是用來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的，特殊稀釋液一般情況不用當(dāng)樣本濃度特別高是先用特殊稀釋液稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品需要再稀釋就也要用特殊稀釋液。

（18）問：測出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線值前面幾盒都是0.98 才正常，后面怎么變成0.93了？

      答：某個點偏離大可以去掉，保留5個點

（19）問：是不是空白對照就是什么都不加？

      答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標(biāo)試劑 其他都可以加。

（20）問：樣本稀釋液是配好的嗎？

      答：樣本稀釋液是配好的

（21）問：樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎？

      答：可以，直接加40ul就可以。

（22）問：檢測的時候需要在操凈臺中操作嗎，還是在外面操作就可以了？

      答：要求不是很嚴(yán)格，根據(jù)自己實驗室的設(shè)備而定，都可以。

（23）問：人和肽素（copeptin）Elisa，洗滌液是濃縮的，是一次配好，還是現(xiàn)配現(xiàn)用？

      答：濃縮的，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（24）問：Elisa方法的不測人血小板第四因子里IgG抗體的滴度嗎？

      答：Elisa不測滴度的，熒光法可以測。

（25）問：酶標(biāo)板不平，影響結(jié)果嗎？

      答：不影響結(jié)果的。

（26）問：小鼠TNF-α ELISA 我的標(biāo)本是細(xì)胞，我想要測的結(jié)果：抑制TNF的產(chǎn)生  空白組、模型組、藥物組，藥物組要成梯度抑制TNF的產(chǎn)生、請問Elisa方法的可以測嗎？

      答：細(xì)胞可以測 但要分組，得到相應(yīng)的梯度值，計算結(jié)果。自己需要多查閱文獻 。

（27）問：人睪酮(T)Elisa,人雌三醇（E3）Elisa，是用什么酶標(biāo)記的？

      答：辣根酶標(biāo)記的  標(biāo)本里不能加疊氮化鈉

（28）問：我測植物水楊酸，標(biāo)本是煙草葉片怎么處理的？那上清液檢測SA時，還需要用甲醇抽提嗎？

      答：稱取煙葉500mg，研磨成粉末狀，加入5ml濃度為0.01mol，PH值為7.4的PBS溶液，充分勻漿，離心取上清液（3000-4000轉(zhuǎn)，15分鐘左右），分裝保存，一般需要長期保存需放在-80度，或者液氮中，備用，不用加甲醇。

（29）問：沒有做出標(biāo)準(zhǔn)曲線來，你知道什么原因嗎？

      答：操作肯定有問題，做之前把標(biāo)準(zhǔn)品搖勻下。

（30）問：買同一個指標(biāo)的幾個盒子，用不用都做標(biāo)準(zhǔn)曲線？

      答：如果同一個指標(biāo)買了3盒，建議每盒都做個標(biāo)曲。同一個盒子 ，即使分幾次用，做一個標(biāo)曲也行了，因為數(shù)值不會偏差太大，差不多。

（31）問：那個特殊稀釋液是做什么的？

      答：一般情況都不要用的，他的的用途就是稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。但是,現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)稀釋好了，所以不需要用了。如果你需要更多的標(biāo)準(zhǔn)品的話，可以用他來稀釋。

（32）問：你們的試劑盒什么成分是進口的 什么事國產(chǎn)的？板子酶標(biāo)和抗體是國產(chǎn)的還是進口的？

      答：抗體、酶標(biāo)試劑、酶標(biāo)板都是進口的、其他試劑是國產(chǎn) 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作完成 呵呵 

（33）問：比如說我偶然發(fā)現(xiàn)只加樣本稀釋液的也出現(xiàn)淺黃色，這怎么解釋呢？

      答：可能的原因是：①洗板時有交叉感染。②樣本稀釋液中本身有本底的一個較小的讀數(shù)。也是ELISA的一個局限性，免疫的很多反應(yīng)稀釋液 洗滌液發(fā)揮了很重要的作用，不加的話效果不明顯，但是加了以后有些成分可能有一部分的干擾作用，可以比較不同的廠家的盒子 都存在這些局限性的，但不影響*終的結(jié)果，ELISA嚴(yán)格的說就是一個半定量的方法。

（34）問：那標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)跳孔是怎么回事？

      答：你完全可以拿同樣的標(biāo)準(zhǔn)品再重新做一次 ，做之前搖勻一下，肯定可以做好 。那是操作問題了 ，你可以再做一次的，之前也有客戶出現(xiàn)過類似的問題，學(xué)生做了2次都沒做好，后來老師自己做，就是搖勻了一下，其他操作都一樣，標(biāo)準(zhǔn)曲線做的很完美。

（35）問：建議標(biāo)準(zhǔn)做復(fù)嗎？

      答：標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔是的

（36）問：血清和腸道粘膜勻漿上清，可以用一個盒子嗎？

      答：可以！

（37）問：36個樣品，定96T的，可以測一個重復(fù)吧

      答：可以

（38）問：不同盒子里的孔下次能不能用？

      答：一個盒子有96孔和48的 要是真的用不完或標(biāo)本不多的情況下，做點處理后在存放。

（39）問：什么叫點處理？

      答：板條和板架都是可拆卸的，可以再用之前拆下4條放置錫箔袋或其他無污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（40）問：不同批的試劑能不能用？

      答：同樣的盒子不同的批號或是同一個批號，也是不建議混用的。同樣的盒子，分兩次的結(jié)果應(yīng)該是不一樣的，但數(shù)據(jù)部應(yīng)相差太大，應(yīng)在可控制或接受范圍。

（41）問：為什么不建議混用？

      答：不同批號的不可以混用 原因很簡單若不同批號的混用的話 可能得出的結(jié)果不是您想要的 數(shù)據(jù)可能偏差較大

（42）問：測細(xì)胞內(nèi)的蛋白的話怎樣處理樣本 ？

      答：ELISA實驗前需對標(biāo)本進行處理將目的蛋白釋放出來，其他按常規(guī)方法處理即可。

（43）問：代測可以直接接受沒有處理好的樣品嗎？

      答：可以

（44）問：每個肌肉和肝臟樣本，*少需要多少克？

      答：1克就可以了。

（45）問：96T的一次用不完，40天以后再用，如何存放？

      答：標(biāo)準(zhǔn)品放-20度 ，其他放4度，并且板條要密封好。

（46）問：標(biāo)曲做兩個重復(fù)少不少？

      答：不少。

（47）問：試劑盒不同批次會對實驗結(jié)果有影響嗎？

      答：有一定的影響，但是影響不是很大。

（48）問：能不能直接用軟件分析數(shù)據(jù)呢？

      答：可以，用EXCEL或者用SPSS等統(tǒng)計軟件。

（49）問：是不是空白就是什么都不加嗎？

      答：空白不加樣本，不加樣本稀釋液 ，不加酶標(biāo)試劑，其他都可以加。

（50）問：你們這個試劑盒要多少上樣量？

      答：上樣量沒有什么限制, 每個孔的上樣量是10ul。

（51）問：我兩個空白孔一個啥都不加，一個加了后面的A液，B液還有終止液, 請問用哪一個？

      答:用加了A液，B液還有終止液的那個更加準(zhǔn)確,因為樣本都加過這些，可以排除相應(yīng)的干擾。

（52）問：離心完以后用什么管子保存？

      答：離心完用EP管保存就可以。

（53）問：收集病人血液標(biāo)本的時候用什么管？

      答：用普通的離心管收集就可以

（54）問：抗體和底物都是進口的吧？

      答：是的，底物就是TMB 進口的。

（55）問：測的是不同的物質(zhì)為什么測的波長一樣呢？

      答:ELISA的波長全是450, 這就是ELISA,不一樣的話，那就是比色法了，不是ELISA。組織勻漿后就可以檢測。

（56）問：說明書寫要7個標(biāo)準(zhǔn)品是做什么用？

      答：7個標(biāo)準(zhǔn)品，只要6個，第七個是空白對照 。 

（57）問：抗凝劑可以用EDTA嗎？或者加什么做為抗凝劑？

      答：可以,肝素或者EDTA。

（58）問：Elisa代測結(jié)果表格每組表達(dá)什么？

      答：S1-S5 代表 標(biāo)準(zhǔn)品個表格是吸光度 第二個是對應(yīng)表 第三個是數(shù)據(jù)處理（是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品那個線性關(guān)系出來的）第四個表*終結(jié)果是都乘以5得到的問：為什么×5？答：因為我們做的時候是10ul樣本+40ul樣本稀釋液做的 問：那個U是代表什么？答：U是調(diào)零的，什么都不加。 

（59）問：為什么檢測結(jié)果*終結(jié)果單位表達(dá)不一樣？

      答：ng/ml是質(zhì)量單位， pmol/L是濃度單位，一般是沒法換算的，在采購試劑盒時請用戶說明單位，1ng/ml = 1000pg/ml。
    兩大主題演講完后，臺下各位科研者以及實驗新手都踴躍提問，積極互動，上海恒遠(yuǎn)的技術(shù)巡回講座第二站圓滿落幕！我司獲得BIM品牌ELISA試劑盒專業(yè)代理權(quán)，歡迎來電咨詢哦！
                    
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