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染色薄層色譜糖脂

閱讀次數(shù):1398   發(fā)布時間:2012/10/8 10:03:23

染色薄層色譜糖脂

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染色薄層色譜可以非常敏感的檢測功能活性碳水化合物配體蛋白受體(1,2)這些碳水化合物結構檢測糖脂分子從復雜的混合物提取出相關的靶組織。一些蛋白質受體可能分析抗體嵌合免疫球蛋白蛋白,凝集素,選擇素,毒素和其他碳水化合物結合蛋白。這種方法可以測定的數(shù)量,大小和費用結合離子色譜法)的碳水化合物配體()。此外,這種方法在確定艾滋病方法用于純化的糖脂配體和隨后監(jiān)測凈化過程(3,4)。相反,糖蛋白,糖脂含有一個半抗原寡糖和分子因此,一旦純化和結構特點,糖脂功能活躍的碳水化合物序列的蛋白受體的研究

材料

層析槽

支持薄層硅膠板熒光指標

玻璃微量注射器

培養(yǎng)皿(150毫米)

玻璃顯微鏡幻燈片

# 1過濾濾紙

加熱干燥機

噴涂裝置

塑料擠壓瓶

聚異丁基甲基丙烯酸甲酯

丙酮

氯仿

甲醇

氯化鉀

磷酸鹽緩沖液0.01米磷酸鈉,氯化鈉的先鋒PH值7.6

牛血清白蛋白

苔黑酚

間苯二酚

二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽民建聯(lián))

協(xié)議

制備的色譜

1。添加150毫升氯仿/甲醇/0.25%氯化鉀5時04分01秒到一個玻璃層析槽(25厘米×27厘米×10厘米內襯過濾紙蓋緊。

2。允許蒸汽坦克平衡至少2小時。的結果是,準備一個新的坦克日報。

制備硅膠

1。所需的大小用剪刀*佳高度為10厘米。

2。畫一個非常輕鉛筆線1.5厘米的平行板的底部不小心劃傷硅膠。

3。使用玻璃糖脂現(xiàn)場樣品沿5毫米路徑上的鉛筆線這些不同的路徑道)的2.5毫米。

4。待測樣品的糖含量地衣酚噴霧應放在一起一部分的薄層板分離的樣品染色。

層析硅膠

1。使用一對長鉗,板頂部和坦克樣本只是以上級別的溶劑允許頂部邊緣緊靠的發(fā)展。

2。掩護坦克緊密,使板保持原狀直到溶劑到達板的頂部(約30 - 45分鐘

3。薄層板的頂部邊緣鉗和允許板徹底干燥空氣下化學通風櫥。

染色標準的碳水化合物

1。剪除部分的薄層板含有糖脂標準。

2。化學煙簡述0.1%地衣酚溶解在5% H2SO 4。

3。立即放在一個加熱爐在120攝氏°大約5 - 10分鐘。

4。如果染色弱,步驟2和3可以重復。

制備的層析染色

1。2µ(碳水化合物結合蛋白)和消極的牛血清白蛋白控制(0.5毫克/毫升)在底部的薄層板和允許完全干燥空氣。

2。浸漬薄層板為90秒,在一個玻璃培養(yǎng)皿(150毫米)含有0.1%的解決polyisobutylmethacrylatepredissolved丙酮的結果,應進入溶液迅速,長邊,在45度角。

3。拆下板直立根據(jù)化學煙完全風干

4。測量表面面積的薄層板。

5。噴霧薄層板磷酸鹽緩沖液含1%牛血清白蛋白和大力淹沒立即在同一溶液中培養(yǎng)皿1小時

染色的主要碳水化合物結合蛋白

1。碳水化合物結合蛋白如抗體)10µ克/毫升1%牛血清白蛋白在公共電視網(wǎng)。數(shù)額將覆蓋65µ升/平方厘米的薄層板的表面。

2。準備一個底座略小于薄層板與玻璃顯微鏡幻燈片底部的一個培養(yǎng)皿。

3。薄層板pbs-1 %牛血清白蛋白,排水,水平放置硅膠的一面,上蓋的玻璃滑動底座不要讓板干任何步驟直到結束

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