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恒遠強調(diào)：使用ELISA試劑盒實驗的過程中不可忽略的三大細節(jié)！

閱讀次數(shù)：858 發(fā)布時間：2014/3/24 14:26:43

我公司根據(jù)*新的elisa新聞中得知，許多朋友們因覺得實驗的操作簡潔而忽略的細節(jié)部分與一些注意事項。相關(guān)細節(jié)我們在之前都了解過，今天在這里上海恒遠生物再一次強調(diào)，使用elisa試劑盒實驗的過程中不可忽略的三大細節(jié)！

細節(jié)一：加樣

在ELISA中除了包被外，一般需進行4－5次加樣。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結(jié)合物的稀釋液應按規(guī)定配制。上海恒遠提醒，加樣時應將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。

細節(jié)二：保溫

在ELISA中一般有二次抗原抗體反應，即加標本后和加結(jié)合物后，此時反應的溫度和時間應按規(guī)定的要求，保溫容器是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應該是金屬的，傳熱容易。如用保溫箱，空濕盒應預先放在其中，以平衡溫度，這在室溫較低時更為重要。加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

細節(jié)三：洗滌

洗滌在ELISA過程中不是反應聚，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。在標本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯一類物質(zhì)即右達到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常作為助溶劑。根據(jù)脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號，結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯20，在ELISA中*為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結(jié)合的作用。

洗滌如不徹底，特別在*后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗體作用而產(chǎn)生干擾。

ELISA板的洗滌一般可采用方法：1、吸干孔內(nèi)反應液；2、將洗滌液注滿板孔；3、放置2min，略作搖動；4、吸干孔內(nèi)液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為3～4次，有時甚至需洗5～6次。

我公司ELISA試劑盒種屬繁多，非常齊全，而且提供免費待測服務！您想要了解或者訂購的話都可以在本網(wǎng)站留言的，也可以直接來電給上海恒遠業(yè)務員。