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人組織蛋白酶L(Cath-L)ELISA試劑盒原理

人組織蛋白酶L(Cath-L)ELISA試劑盒原理
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價(jià)格: 4900

型號(hào):

采購度:155    原產(chǎn)地:美洲

發(fā)布時(shí)間:2018/2/28 17:25:29

產(chǎn)品簡介:人組織蛋白酶L(Cath-L)ELISA試劑盒原理用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人組織蛋白酶L(Cath-L)的含量。

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標(biāo)簽:Cath-L試劑盒   人組織蛋白酶L   ELISA試劑盒原理   

詳細(xì)信息
 
人組織蛋白酶L(Cath-L)elisa試劑盒原理
 
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人組織蛋白酶L(Cath-L)的含量。
有效期:6個(gè)月
保存條件:2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人組織蛋白酶L(Cath-L)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人組織蛋白酶L(Cath-L)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

人組織蛋白酶L(Cath-L)ELISA試劑盒原理規(guī)格
規(guī)格可測樣數(shù)標(biāo)準(zhǔn)孔空白對(duì)照產(chǎn)地庫存
96T 85個(gè)樣 10 1 進(jìn)口現(xiàn)貨
48T 37個(gè)樣 10 1 進(jìn)口現(xiàn)貨

自備材料
1)蒸餾水。
2)加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3)振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1)避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2)實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加   樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手   接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9)按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量shengli鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
1)標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。 每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物 素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3   次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。
1. 靈敏度:*小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人組織蛋白酶L(Cath-L)ELISA試劑盒原理結(jié)果判斷與分析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

更新時(shí)間:2024/9/19 9:16:19

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